Sıvı Kültürden DNA İzolasyonu
- Gece boyu uygun besiyerinde büyüyen kültür
oda sıcaklığında 10 000 rpm’de 5 daika santrifüj yapılır.
- Süpernatanı uzaklaştır
- Pellet 250 µl resuspend solusyonunda çöz
- Üzerine 250 µl liziz solusyonu ekle ve
hafifçe karıştır
- 350 µl nötralizasyon solusyonu ekle ve
hafifçe karıştır
- Santrifüj yap (13 000 rpm 5 dakika, oda
sıcaklığında)
- DNA nın spin kolona bağlanması için,
süpernanı kolona aktar
- Santrifüj yap (13 000 rpm 1 dakika, oda
sıcaklığında)
- Kolon Yıkaması için, 500 µl yıkama
solusyonu ekle
- Santrifüj yap (13 000 rpm 30-60 sn, oda
sıcaklığında)
- Altta kalan sıvıyı uzaklaştır.
- Spin kolon tekrar boş santrifüj yap (13
000 rpm 1 dakika, oda sıcaklığında
- DNA yı kolondan indirmek için, spin kolonu
yeni ephendorf tüpüne aktar
- Kolon üzerine 50 µl EB ekle 2 dk oda
sıcaklığında inkübe et
- Santrifüj yap (13 000 rpm 2 dakika, oda
sıcaklığında)
- Altta kalan kısım DNA içerir
- İzole edilen DNA -20 OC’da saklanmalıdır
