Çölde Tarım Mümkün

Kuzey Etiyopya’daki tarımcıların zorlu hava şartları ile mücadelesini kolaylaştırmak amacıyla bir şirket teknolojik bir sera sistemi icat etti.

Yeni teknolojiyle kurulan seralar gün içinde havadaki nemi ve çiğleri topluyor. Akşamüstü ise bu toplanan çiğ, suya çevriliyor. Gün içinde, yeşil evin üst bölgesine sıcak hava depolanıyor. Gece olduğunda ise soğuyan hava ile birlikte yeşil evin bacası açılıyor, soğuk havanın bacadan içeri nem vermesi sağlanıyor. Böylece yapının altına ekilen ürünler sulanıyor.

Kurak yerler için ideal Bu seralar aslında çok düşük teknolojili bir icat. Bambu, halat gibi basit malzemelerden, poli-karbonat duvarlardan ve biyo-plastik bir bacadan oluşuyor. İcadın sahibi olan şirket ise, Afrika gibi çok kurak yerlerdeki insanların tarım yapabileceğine ve mahsul elde edeceğine inanıyor. Şirket şimdiden dünyanın her yerinden ürünlerini inceleyebilmek için istek geldiğini söylüyor.

Spektrofotometre ile RNA Miktarının Hesaplanması Nasıl Yapılır ?

Materyal

İzolasyonu gerçeklestirilen bitki ve memeli RNA örnekleri

Araç ve Gereçler

• Kuartz spektrofotometri küvetleri
• Spektrofotometre
• Pipet ve steril pipet uçları
• 1.5 ml mikrofüj tüpleri

Uygulama

1. 1.5 ml’lik iki mikrofüj tüpü K (Kör, Blank) ve Ö (Örnek) seklinde isaretlenir.
2. Örnegi içeren tüpün içerisine öncelikle 98 μl distile su, daha sonra da 2 μl RNA izolatı konularak pipet yardımıyla karıstırılır. Bu asamada 1:50 seyreltme yapılmıs olur.

3. Kör tüp sadece 100 μl distile su içermektedir.
4. Spektrofotometrede nükleik asitler için ölçüm yapılan 3 numaralı dosya açılır ve yapılan seyreltme ve dogrulama faktörleri gibi ayarlamalar yapılır. Kullanılan spektrofotometreye göre bu asamanın degisecegi unutulmamalıdır.

5. Referans degerler K kodlu tüpten elde edilen ölçüm ile sıfırlanır. Bu asamada gerçeklestirilen solüsyondan ileri gelecek olan spektrofotometrik algılamaların sıfırlanmasıdır. Bu sekilde örnekten yapılacak ölçümlerin sadece örnek içerisinde çözülmüs molekülleri tespit etmesi saglanır.

6. Ö kodlu tüpün ölçüm degerleri (260 nm, 280 nm ve saflık degerleri) laboratuvar defterine aktarılır. Alet tarafından ölçülen RNA miktarı ng/μl olarak deftere alınır.

Proteinler 280 nm’de absorbsiyon gösterdikleri için OD 260/OD 280 degeri hesaplanır. Eger bu deger 1.8-2.0 arasında ise elde edilen nükleik asitlerin temiz oldugu varsayılır.

RNA konsantrasyonu (μg/ml) = (OD260 x Seyreltme katsayısı x 40 μg/ml) / 1000

Not: Absorbansın ‘1’ degeri 1 cm3’lük küvette 50 μg/ml miktarında çift zincirli DNA’yı, 33 μg/ml tek zincirli oligonükleotidleri ve 40 μg/ml ise tek zincirli RNA’yı temsil etmektedir.

Sonuçların Degerlendirilmesi ve Rapor Hazırlanması

Spektrofotometri ile ölçülen 260 nm ve 280 nm degerleri kullanılarak izole edilen RNA örneklerinin konsantrasyonlarının ve saflık derecelerinin hesaplanması, karsılastırılması ve sonuçların deneysel uygulama asamaları açısından degerlendirilmesi.

Denizler altında balon seralar

İtalya’da Okyanus Resif Grubu adında bir grup 4 yıldır sualtı seraları üzerinde çalışmalar yürütüyor. Denizin sıcaklığı ve yüksek karbondioksit oranından faydalanılarak gerçekleştirilen projede İtalya’da Noli sahilinde denizin 6 metre altında zemine demirlenmiş bir serada çilek yetiştiriliyor.

Nemo’nun Bahçesi adı verilen sera projesinde, seraların balon şeklindeki yapısı denizin sundukları ile birleşince bitki yetiştirilmesi için uygun imkânlar sağlıyor. Seraların sıcaklığı 26 °C ve nem oranı ise yüzde 83. Su altında sıcaklık sabit kalıyor. Seraların şekli sayesinde su sürekli buharlaşarak nem şeklinde bitkilerle bir araya geliyor. Ayrıca kapalı alandaki yüksek karbondioksit de bir anlamda steroid etkisi yapıyor ve bitkiler daha hızlı büyüyor. Proje, şimdiden birçok ülkenin ve grubun ilgisini çekti. Gelecekte daha yüksek teknolojiler kullanılarak sualtı seralarının ekonomik olarak sürdürülebilir hale getirilmesi amaçlanıyor.

Biyoteknoloji Bilimi

Dünyaca Karpuz

ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELİSA) Yöntemi Nedir ?

ELISA yönteminin prensibi, özgül antijen-antikor arasındaki reaksiyona dayanır.

Bu teknikte işaretsiz antijen veya antikor tayin edebiliriz.

İşaretli konjugatın hazırlanmasında işaretleyici olarak enzim  kullanılır.

Reaksiyonun tamamlanmasından sonra ayırma işlemi yapılır ve ortama bir substrat ilave edilerek spektrofotometrik olarak enzim aktivitesi ölçülür.

ELISA KOMPONENTLERİ

Katı faz (Matriks): Manüel elisa yöntemlerinde kullanılan, genellikle çukurlarına analitlerin ( antikor veya antijen ) bağlı olduğu 96 çukurlu mikropleytlerdir.

Antikor: IgG fraksiyonlarıdır.

Enzim ve substratlar: Konjugatın işaretlenmesinde en sık kullanılan alkalen fosfataz(AP) ve horseradish peroksidaz (HRP) enzimleridir.

AP için BCIP/NBT ( 5-bromo-4chloro-3-fosfat indolyl/Nitro mavi tetrazolium)

HRP için TMB ( tetramethylbenzidine ) kullanılır.

Yıkama: ELİSA yönteminde her bir safha arasında fosfatlı tampon solüsyonu (PBS) ile yıkama işlemi önemli yer tutmaktadır.

Durdurma: ELİSA’nın son safhası olan ‘reaksiyon durdurulması’ basamağında asidik ve bazik çözeltiler ( H2so2, HCL, NaOH ) kullanılır.

ELİSA Çeşitleri Nelerdir ?

Direkt ELISA
İndirekt ELISA
Sandwich ELISA
Kompetetif ELISA

Direkt ELISA
Direkt ELISA yöntemi yüksek molekül ağırlıklı antijenin miktar tayini için uygundur.
Numune içindeki antijenler nonspesifik olarak mikrotitre kabının kuyu yüzeyine bağlanır.
İşaretli antikor kuyucuklara eklenir.
Belirli sürelerde inkübe edilir.
Yapılan yıkama işlemi ile bağlanmamış işaretli antikorlar ortamdan uzaklaştırılır.
Kuyulardaki bağlanmış enzim işaretli antikor miktarı, ortama enzimin substratının eklenmesi ile oluşan renk değişimi sayesinde belirlenir.

İndirekt ELISA
Numune içindeki antijenler mikrotitre kabının kuyu yüzeyine bağlanır.
İlk olarak işaretsiz primer antikorlar kuyulara eklenir.
Antijen ve primer antikor belirli sürelerde inkübe edilir.
Yapılan yıkama işlemi ile bağlanmayan primer antikorlar ortamdan uzaklaştırılır.
Sonrasında primer antikorlara spesifik, enzim ile işaretli sekonder antikor kuyulara eklenir.
Belirli sürelerde inkübe edilir.
Tekrar yapılan yıkama işlemi ile bağlanmayan işaretli sekonder antikorlar ortamdan uzaklaştırılır.
Son olarak enzimin substratı kuyulara eklenir ve elde edilen renk değişimi ile antikorlar belirlenir.

Nonkompotetif ELISA (Sandwich yöntemi)
Bu test ile bilinmeyen örneklerin içindeki antijen miktarı belirlenir.
Direkt veya indirekt ELISA ile oluşan renk değişimi antikorun varlığına işaret ederken; Sandviç ELISA da oluşan renk değişimi antijenin varlığına işaret eder.

Sandwich ELISA’ da antikorlar (yakalama antikoru) mikrotitre kabının kuyucuklarının katı fazına immobilize edilir.
Antijeni içeren örnek daha sonra ilave edilir ve antijen-antikor kompleksinin oluşması beklenir.
Bağlanmamış proteinler yıkama basamakları ile uzaklaştırılır.
Enzim işaretli ikinci bir antikor (deteksiyon antikoru), yakalama antikoruna bağlanmış antijene farklı bir epitopundan bağlanır.
Bağlanmayan deteksiyon antikorunun yıkama işlemi ile uzaklaştırılmasından sonra, ortama enzime ait substrat eklenir.
Substrat deteksiyon antikoruna bağlı enzimle reaksiyona girerek renk değişimine neden olur.
Bu renk değişimi de spektrofotometre ile ölçülür.

Renkli ürün oluşumu, işaretsiz ligandın (serumdaki antijen veya antikor) konsantrasyonu ile doğru orantılıdır.
Bu tekniğin ana avantaji, antijenin kullanılmadan önce saflaştırılmasına gereksinim olmamasidir ve sandviç ELISA çok spesifiktir.
Bu tekniğin dezavantaji ise her antikorun kullanılamamasıdır. Seçilen monoklonal antikor kombinasyonları aynı antijen üzerinde üst üste binmeden farklı epitopları tanımalıdır.

Kompetitif ELISA
Mikrotitre kabının kuyucuklarının katı fazına antijen veya antikor bağlanır.
Çukurlara serum ( işeretsiz ligand içerir ) ve reaktif ( işaretli ligand içerir ) eklenir.
İnkübasyon süresince immobilize antijen veya antikora bağlanmak için işaretsiz ligand ile enzim işaretli ligand yarışırlar.
İnkübasyon ve yıkama işleminden sonra substrat eklenir.
Reaksiyon sonucu oluşan renk değişikliği, hasta örneğindeki işaretsiz ligand miktarı ile ters orantılıdır. Örnekte ne kadar az işaretsiz ligand varsa birleşen işaretli ligand miktarı da o kadar fazla olacaktır.
Sonuçlar spektrofotometrik olarak değerlendirilir.

Kompetitif ELISA yöntemi, sıklıkla antikor ölçümünde kullanılmaktadır.

Plazmit DNA İzolasyonu